放线菌形态的观察
一、目的要求1．学习并掌握观察放线菌形态的基本方法．2．初步了解放线菌的形态特征，二、基本原理放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性细菌，常见放线菌大多能形成菌丝体，紧贴培养基表面或深入培养基内生长的叫基内菌丝（简称“基丝”，)，基丝生长到一定阶段还能向空气中生长出气生菌丝〔简称“气丝”)，并进一步分化产生孢子丝及孢子。有的放线菌只产生基丝而无气丝。在显微镜下直接观察时，气处在上层、基丝在下层，气理色暗，墓丝较透明．孢子丝依种类的不同，有直波曲、各种螺旋形或轮生．在油镜下观察，放线菌的孢子有球形、椭圆、杆状或柱状．能否产生菌丝体及由菌丝体分化产生的各种形态特征是放线菌分类鉴定的重要依据．三、器材l菌种细黄链霉菌或青色链霉菌．弗氏链霉菌。2培养基灭菌的高氏I号琼脂3仪器或其他用具经灭菌的：平皿、玻璃纸、盖玻片、玻璃涂棒，以及载玻片，接种环，接种铲，镊子，石炭酸复红染液，显微镜等。四、操作步骤1.扦片法(1）倒平板取融化并冷至大约50℃的高氏1号琼脂约20而倒平板，凝固待用．（2）接种用接种环挑取菌种斜面培养物（孢子）在琼脂平板上划线接种．（3）扦片以无菌操作用镊子将灭菌的盖玻片以大约45度角扦人琼脂内（扦在接种线上），扦片数量可根据需要而定(4）培养将扦片平板倒置，28℃培养，培养时间根据观察的目的而定、通常3-5d．(5）镜检用镊子小心拔出盖玻片，擦去背面培养物，然后将有菌的一面朝上放在载玻片上，直接镜检．2玻璃纸法(l）倒平板同扦片法．(2）铺玻璃纸以无菌操作用镊子将已灭菌（-℃干热灭菌2h）的玻璃纸片（似盖玻片大小）铺在培养签琼脂表面，用无菌玻璃涂棒（或接种环）将玻璃纸压平，使其紧贴在琼脂表面，玻璃纸和琼脂之间不留气泡。每个平板可铺5-10块玻璃纸．也可用略小于平皿的大张玻璃纸代替小纸片，但观察时需要再剪成小块．(3）接种用接种环挑取菌种斜面培养物（孢子〕在玻璃纸上划线接种．(4）培养将平板倒里，28℃培养3-5d.（5）镜检在洁净载玻片上加一小滴水，用摄子小心取下玻璃纸片，菌面朝上放在玻片的水滴上，使玻璃纸平贴在玻片上（中间勿留气泡），先用低倍镜观察，找到适当视野后换高倍镜观察。操作过程，勿碰动玻璃纸面上的培养物．3印片法(1）接种培养用高氏I号琼脂平板，常规划线接种或点种，28℃培养4-7d．也可用上述两种方法所使用的琼脂平板上的培养物，作为制片观察的材料．(2）印片用接种铲或解剖刀将平板上的菌苔连同培养基切下一小块，菌面朝上放在一载玻片上．另取一洁净载玻片里火焰上微热后，盖在菌苔上。轻轻按压，便培养物（气性、孢子丝或孢子）附（“印”）在后一块载玻片的中央，有印迹的一面朝上，通过火焰2-3次固定．(3）染色用石炭酸复红覆盖印迹，染色约1min后水洗．（4）镜检干后用油镜观察．五、实验报告1.结果绘图说明你所观察到的放线菌的主要形态特征．2．思考题(l)试比较三种培养和观察放线菌方法的优缺点。(2）玻璃纸培养和观察法是否还可用于其他类群微生物的培养和观察？为什么？（3）镜检时，你如何区分放线菌的基内菌丝和气生菌丝？霉菌的形态观察
[实验器材]
1．菌种
曲霉(Aspergillussp.)，青霉，根霉(Rhizopussp.)和毛霉（Mucorsp.）培养2~5d的马铃薯琼脂平板培养物。
2．培养基
马铃薯培养基（简称PDA）
3．仪器或其他用具
无菌吸管，平皿，载玻片，盖玻片，U型玻棒，解剖刀，镊子，50%乙醇，20%的甘油以及显微镜等。
[目的要求]
学习并掌握观察霉菌形态的基本方法。2．了解四类常见霉菌的基本形态特征。
[基本原理]
霉菌菌丝体由基内菌丝、气生菌丝和繁殖菌丝组成，其菌丝比细菌及放线菌粗几倍到几十倍。可以采取直接制片和透明胶带法观察，也可以采取载玻片培养观察法，通过无菌操作将薄层培养基琼脂置于载玻片上，接种后盖上盖玻片培养，使菌丝体在盖玻片和载玻片之间的培养基之间的培养基中生长，将培养物直接置于显微镜下可观察到霉菌自然生长状态并可连续观察不同发育期的菌体结构特征变化。
[操作步骤]
1．培养小室的灭菌
在平皿皿底铺一张略小于皿底的圆滤纸片，再放一U形玻棒，其上放一洁净载玻片和两块盖玻片，盖上皿盖、包扎后于℃灭菌20~30min，烘干备用。
2．琼脂块制备
通过无菌操作，用解剖刀由马铃薯琼脂薄层平板上切下1cm2左右的琼脂块，将其移至培养小室的载玻片上，每片两块。
3．接种
通过无菌操作，用接种针从黑曲霉或黑根霉马铃薯琼脂平板培养物中挑取很少量孢子，接种于小室中琼脂块边缘上，将盖玻片覆盖在琼脂块上。
4．培养
通过无菌操作，在培养小室中圆滤纸片上加3~5mL灭菌的20%甘油（用于保持湿度），盖上皿盖，于28℃培养7天。
5．镜检
取出载玻片用低倍镜和高倍镜镜检。
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